منابع مقاله درمورد ميکروليتر، ميلي، لازم:

سانتيگراد هم استفاده کرد. البته بايد توجه داشت که مدت زمان استفاده نبايد زياد باشد در غير اين صورت DNA بيش از حد خشک ميشود.
(11) با توجه به حجم DNA بين 100 تا 200 ميکروليتر آب مقطر استريل بدان افزوده شد تا DNA حل گردد و سپس در دماي 4 درجه سانتي گراد نگهداري شدند.
2-2-3)روش استخراج DNA با استفاده از کلروفرم:
مواد لازم:
* آب مقطر
* NaCl اشباع (6مولار)
* N-Lysis
* کلروفرم
* اتانول 100%
* اتانول 70%
* تجهيزات لازم:
* ميکروتيوپ با حجم 5/1 ميکروليتر
* سانتريفيوژ با حداکثردور 14000 (اپندروف)
* هات پليت (زيماژن-ايران)
* ميکروفيوژ ورتکس (mxcell)
* هود لامينار کلاس 2 يا هود PCR يا PCR Work Station(زيماژن)
* سمپلرهاي متغير از10 تا 1000ميکروليتر(socorex)
* سر سمپلر هاي کريستالي، زرد و آبي رنگ
* دستکش هاي لاتکس
* رک سر سمپلر
* روپوش
* پارافيلم
روش تهيه محلولهاي مورد نيازجهت استخراج DNA:
روش تهيه محلول کلريدسديم 6 مولارNaCl 6 M ) )
جهت تهيه100 ميلي ليترمحلول کلريدسديم 6 مولار مقدار31 /564 گرم NaCl درآب مقطرحل گرديد وحجم نهايي به100 ميلي ليتر رسانده شد، محلول حاصل در دماي اتاق نگهداري ميشود.
محلولN-Lysis:
محصول شرکت
وزن
ماده
Merck
58gr
Tris
Merck
1/57gr
EDTA
Sigma
5 gr
SDS
مواد ذکر شده در جدول فوق را با حجمهاي مورد نظر مخلوط کرده و سپس با استفاده از آب مقطر ديونيزه حجم نهايي را به 500 ميلي ليتر ميرسانيم.
استخراج DNA از خون به روش کلروفرم:
اين روش در دو مرحله انجام ميشود:
مرحله اول
1) 500 ميکروليترخون را درويال 1.5 ميليليتري ريخته به آن 800 ميکروليتر آب مقطر سرد اضافه نموده و آن را پيپتينگ ميکنيم. سپس آن را با دور rpm 9000 به مدت 20 دقيقه درسانتريفوژ قرار ميدهيم . اين عمل راتاسه بارتکرار مينماييم .

این نوشته در No category ارسال شده است. افزودن پیوند یکتا به علاقه‌مندی‌ها.

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *